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应用光学显微镜定过碘酸氧化产生的醛基
所属分类：显微镜百科 点击次数：203 发布日期：2022-06-20
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应用光学显微镜定过碘酸氧化产生的醛基 光学显微镜组化中PAs法是靠测定过碘酸氧化产生的醛基，据认为这个氧化步骤对相邻两碳原子上带有一对未被取代的游离羟基的糖残基也有相当的特异性。用六亚甲四胺(又称亚甲胺)形成络合物的碱性银溶液可用来测定醛基。现已广泛用于电镜技术中染PAS反应阳性的结构。 1．具体操作步骤 (1)一般用多聚甲醛固定组织，用戊二醛固定从理论上讲可能有引进醛基的危险，不能用丙烯醛。有人用四氧化溅后固定再去饿，但更好不用。 (2)适当缓冲液洗组织，乙醇脱水，环氧树脂包埋，超薄切片。 (3)切片于惰性金属载网(金网或镍网等)，用l％过碘酸水溶液室温处理20—2Stain。 (4)蒸馏水洗lOminX 3(也可在蒸馏水中过夜)。 (5)用双蒸水制备下液；A液，3％新鲜制备的六亚甲四胺(hexamethylenetetμmine)溶液。B液，5％硝酸银℃液，5％四硼酸钠。然后将5mi B液加入到100mi A液中，搅拌，使所生成的沉淀溶解，再加入12miC液和lOOml双蒸水配成六亚甲四胺银溶液。 (6)将切片置六1gi甲四胺银溶液的液面上，盖好容器，避光于60℃烘箱中染40—60min，或等切片显示出淡棕色为止。 (?)将容器遮盖好放冰箱，冷却后再把切片转到蒸馏水表面。 (8)用5％硫代硫酸钠洗5rain， 用蒸馏水洗2次。干燥后复染或不复染，电镜观察。 2．对照 (1)省略第(3)步的过碘酸处理，切片无特异性染色。 (2)第(3)步前还原和烷化蛋白质的一SH基，可证明染色特异性。
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