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固相载体上特异同工酶分子数等于带有标记
所属分类：显微镜百科 点击次数：123 发布日期：2022-06-20
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固相载体上特异同工酶分子数等于带有标记 酶联免疫吸附法(enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA) 又称酶标免疫吸附法(enzyme．1aballed immunosorbent assay，EUSA)，属酶免疫法(enzyme immunologic assay，En)的一种，又可分为直接法、间接法、竞争法和非竞争法，其中以非竞争性的夹心ELISA法较为常用而灵敏，此法是将特异的同工酶抗体吸附在固相载体(常用聚苯乙烯微孔反应板或珠子)上，加入样品后抗体与特异的同工酶结合，清洗掉其他型别的同工酶，再用带有标记酶的相应抗体与固相载体上所结合的同工酶结合，即固相载体上结合的特异同工酶分子数等于带有标记酶的抗体分子数，也就等于标记酶的分子数，标记酶的活性强弱可间接反映所结合的同工酶多少，测定标记酶的活性即代表所结合的同工酶活性。由于所测的同工酶既与固相载体上的抗体结合，又与带有标记酶的抗体结合，夹在2种抗体之间，故称为“夹心”酶联免疫吸附法。 夹心ELISA尤其适用于测定有杂化亚基的同工酶。例如，测定CK-MB时，先将抗M亚基的抗体固定聚苯乙烯微孔板上使抗体固相化，加入待测样品后，样品中的CK-BB因不能与固相上的CK-M抗体结合而被洗去，而CK-MB及MM被结合于固相上。经一定时间后再加人用酶(常用辣根过氧化物酶或小肠脚)标记的抗CK-B亚基的抗体，此酶标抗体只能和固相上的CK—MB结合，而不能与CK-MM结合。最后测定固相上的标记酶(√岫)的活性，即可以标准曲线求知CK．MB的浓度。样品中的CK-MB愈多，结合酶标的CK-B抗体愈多，固相上标记酶的活性也愈高。
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