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高效液相层析-液固层析和液层析实验
所属分类：显微镜百科 点击次数：213 发布日期：2022-06-20
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高效液相层析-液固层析和液层析实验 混合性凝胶是由上述凝胶按不同比例混合而成，这类凝胶的颗粒及孔径比较均一、机械性能好、耐高压、流速快且分辨率高。 凝胶层析法设备简单、操作方便，故早已被用于同工酶的分离，但由于大多数同工酶的相对分子质量均很接近，故凝胶层析法主要用于分离同工酶的高分子聚合物或同工酶与免疫球蛋白的复合物。 (三)亲和层析法 是利用配基和大分子之间专一性亲和力而设计的一类层析分离方法。将相应的配基(如底物、辅酶、抗体)与某种适宜的不溶性大分子基质(常用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶)共价地结合，将样品加到浸泡于缓冲液中的不溶性基质柱上，其中某些同工酶被选择性地留在柱上，其他型别被洗脱。然后用不同pH和不同离子强度的含有底物的溶液将吸附于柱上的同工酶洗脱收集，并测其活性，此谓亲和层析法。此法过程简单、迅速、特异性高、分离效率强，适于分离和提纯同工酶。 (四)高效液相层析法 又称高效液相色谱法、高压或高速液相色谱法，是在经典柱层析的基础上发展而来的，具有高效、高速、高灵敏度和自动化等优点。按固定相聚集状态可分为液固层析和液液层析两大类；按分离机制不同可分为吸附、分配、离子交换凝胶和亲和层析等类型。在凝胶渗透色谱分析中，大分子的同工酶被排阻无法进入填料孔，更先洗脱；小分子的同工酶可渗入填料孔，洗脱滞后。整个过程是在流动相和填料孔内的固定相液体之间进行溶质分子分配的过程。在离子交换色谱中的固定相是带电的交换基团，该基团与酶蛋白分子的离子基团相互交换，根据不同离子基团的交换特性之差异及相互作用不同，将同工酶分离。
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