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氨基酸的混合物测量记录精密的仪器实验设计
所属分类：显微镜百科 点击次数：100 发布日期：2022-06-20
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氨基酸的混合物测量记录精密的仪器实验设计 当洗脱缓冲液的pH增大时，氨基酸上面的正电荷减少，直到氨基与树脂的结合减弱到可以被洗下时为止。每种氨基酸达到这一点的条件是不同的，这取决于分子上其他可电离基团的性质，在非极性氨基酸的情况下，甚至还取决于侧链的性质。因此利用在低pH时吸附氨基酸，然后再慢慢提高洗脱剂的pH和离子强度，就能成功地做到重复性好而又轮廓清楚地把所有氨基酸分开。在现代实际中，这种过程已全部自动化了。为了容易分开，氨基酸的混合物被自动地放到一根至少含有二种类型树脂的柱上去。在洗脱缓冲液中，产生一种pH和离子强度的梯度，然后把从柱底流出的氨基酸用比色测定法监控，测得的结果接着就被记录于记录纸上。在最精密的仪器中，比色数据可输入到台式计算机，计算机自动计算各种氨基酸的量，以及该氨基酸在原来蛋白质中的百分率，或更通常是计算残基数／1000残基。 要测定一个蛋白质的氨基酸顺序，必须把蛋白质断成有限数量的较小的肽单位。为了形成合理数量的肽以进行以后的分析，断裂必须是专一的和重复性好的。芳此常利用纯化的蛋白酶，多半是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶来裂解蛋白质。用这些酶去水解蛋白质只需极少量就够了，而且近年来已制成能把这些酶结合到不溶性的、不活泼的聚合支持物上去的活性衍生物。使用这些不溶性的衍生物，酶就能用离心法从水解溶液中回收并再次利用。
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