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白血球染色体的分离的步骤-生物显微镜技术

1.抽血5ml入含抗凝血剂的试管中, 离心2,500rpm, 10min, 以微量吸管吸取白血球层, 置入1.5ml离心管中. 加入600μl red blood cell lysis buffer, 先充份溷合后, 再置平台顷斜器上缓缓溷合5min, 离心3,000rpm, 5min, 吸除红色上清液.

2.将1ml已经高温高压消毒过且已加入5﹪牛血清及含2×10-3mM L-glutamine的MEM组织培养液加入上述离心管中, 充份溷合, 将此含白血球的培养液全部吸出, 置入25cm2的组织培养皿中, 再加入4ml的上述MEM组织培养液, 再加入无菌秋水仙素(colcemid),使最终浓度为10-2μM, 将组织培养皿置含5﹪CO2组织培养箱中, 2hr.

3.将上述培养液全部倒入40ml离心管, 离心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 加入低张溶液(配方：0.075M KCl)3ml, 充份溷合, 置37℃, 20min, 再加入固定液(配方：甲醇：冰醋酸＝3：1)6ml, 缓缓充份溷合, 离心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 再加入5ml之固定液, 缓缓充份溷合, 离心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 再加入5ml之固定液, 缓缓充份溷合, 离心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 将白血球液溶在1ml的固定液中.

4.将清洁载玻片置酒精中浸泡, 取出, 将上述白血球液滴1~2滴于载玻片上, 使其风乾, 滴上Giemsa染色. 在显微镜下400x摄影.