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组织学之染剂染色法教程-生物显微镜专业供应！

 
1.基本步骤：

(1)   fixation：利用共价键的生成，让物质的相对位置固定

LM：fomalin的醛基能与一级胺作用

EM：osmium tetraxide：能与双键CC产生cross link

(2)   dehydration：利用alcohol

(3)   embedding：利用parrafin(石蜡)或是plastic resin(树脂)包埋

(4)   sectioning：利用microtome做切割

(5)   mounting：光学用显微镜载玻片，电显用copper grid

(6)   staining：光学用染剂法；电显用铅、铀等原子序大的金属，因放出的电子较多能够增加对比度

2.      染色：

(1) dye染剂染色法

→hematoxylin与eosin：H E染色法

(a)    hematoxylin带正电，染负电物质(ex.核酸)，蓝色

(b)   eosin带负电，染正电物质(ex. 蛋白质中的Arg , Lys)

→acidic dye：带负电荷，染basic substance

Basic dye：带正电荷，染acidic substance

(2) enzyme histochemistry

→利用酵素作用mechanism，给予适当的substance以侦测该酵素的位置

(3) immunocytochemistry

→设计抗体辨识特定的物质，在利用萤光呈色，标示该物质的位置

→依照萤光物质接的位置分成direct与indirect两种

a. direct：primary antibody上有萤光物质，直接辨识target

b. indirect：primary antibody辨识target，再加入带有萤光物质的’secondary antibody辨识primary antibody

(4) FISH(fluorescent in situ hybridization)

→加入一段带有萤光的DNA probe(探针)，会与其互补的DNA，mRNA片段hybridize

→藉此可以侦测特定gene，mRNA的位置(ex,唐氏症的检测)

(5) autoradiograph

→利用放射性标定，观察生化路径或是标定酵素位置

→加入标定的amino acid，即可观察细胞中合成蛋白质的路径