大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章：:

细胞继代培养实验步骤！利用显微镜观察细胞

细胞继代培养实验目的：

细胞生长到高密度时，把细胞收集起来，分殖在新的培养盘中，让细胞有更多而足够的空间继续生长。

实验步骤：

1.从冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回温。

2.关闭无菌操作台UV灯，并开启无菌操作台风扇及日光灯。喷酒精于无菌操作台平面，并擦拭乾淨，以达到消毒效果。

3.将要使用到的物品，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。

4.将细胞，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。

5.将玻璃吸管接再pump的塑胶吸管上。

6.去除细胞培养液，再加入PBS清洗细胞，并来回轻轻摇摆几次。

*15公分Dish，加入10ml PBS；9公分Dish，加入5ml PBS。

7.去除PBS，再加入Trypsin。

*15公分Dish，加入5ml Trypsin；9公分Dish，加入3ml Trypsin。

8.放入细胞培养箱 (37℃) 3~5分钟，以加速酵素作用，使附着型细胞漂浮起来。

9.轻轻拍打几次，再利用显微镜观察细胞是否全部漂浮起来。

10.喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。

11.加入与Trypsin同样体积的细胞培养液，并来回轻轻摇摆几次溷合，以综合酵素，阻止酵素继续反应。

12.吸取细胞液放入离心管。

13.细胞液给予离心。 (转速1000rpm，温度20℃，5分钟)

14.去除上清液，加入H9C2 medium。

15.利用微量吸管来回吸取，使细胞与H9C2 medium完全平均溷合，形成细胞悬浮液。

16.回种到Dish。

*15公分Dish，总体积25ml H9C2 medium；9公分Dish，总体积10ml H9C2 medium。

17.移至入细胞培养箱培养。