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利用相位差显微镜观察-细胞存活测定实验步骤
所属分类：显微镜百科 点击次数：249 发布日期：2022-05-09
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利用相位差显微镜观察-细胞存活测定实验步骤
细胞存活、死亡之测定法一、 相位差显微镜（phase-contrastmicroscope）利用相位差显微镜，观察给药前后细胞型态，以了解细胞经药物处理后型态的变化，评估药物对细胞状态的影响。二、 细胞存活率之测定：MTT 还原分析法（3-（4,5-dimethylthianol-2-yl）-2,5diphenyltetrazolium bromide reduction assay）
一、原理正常健康的细胞，其细胞粒腺体内膜的琥珀酸去氢醣（succinatedehydrogenase）具有将 MTT（黄色）还原为 MTT-formazan（紫色）的能力。而紫色颜色的深浅程度可代表还原能力的强弱，即琥珀去氢醣的活性，同时也反应粒腺体的生理状况。由于粒腺体是细胞内对环境因素最为敏感，因此粒腺体的生理状况可代表细胞的生理状况。当还原能力强时，表示克氏循（Kreb’s cycle）环进行速率快，可产生较多的能量供细胞使用，故可代表细胞的健康情形良好
二、试剂1. 5mg/ml MTT 溶液（溶剂：1X PBS），避光 4℃保存。2. Dimethyl sulfoxide（DMSO）：Sigama
三、实验步骤1. 每孔留下 350μl 的留胞培养液，加入 35μl MTT 溶液（黄色），避光并静置室温下反应 1 小时。2. 移除含有 MTT 的细胞培养液，加入 350μl DMSO 以溶解紫色颗粒。待紫色颗粒完全溶解后，每孔各取 125μl 的紫色溶液置入 96-wellRIA/EIA plate 中，设定波长为 570 nm（630 nm 当作参考波长），测其吸光值。吸光值越高，表示 MTT-formazan 产量越高，即代表细胞之存活率越高。3. 计算细胞细胞存活率＝样品吸光值 / 控制组吸光值 × 100﹪
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