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食品微生物中的应用-检测细胞图像显微镜
所属分类:显微镜百科 点击次数:123 发布日期:2022-06-20
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食品微生物中的应用-检测细胞图像显微镜qPCR是在循环过程中,通过荧光探针检测扩增所得的基因产物的方法,可在30~90 rain内得出结果。有许多可用的荧光探针,例如SYBR Green I和荧光能量共振转移探针。这些探针可用来监测反应全过程并且省去了最终产物的电泳。荧光能量共振转移探针是与DNA单链互补的短链寡核苷酸[2¨]。当用这一方法检测水和下水道样品中的蓝氏贾第虫(以pgiardin基因为目标)和小球隐孢子虫(COWP基因为目标)时,检出限前者为1个细胞,后者为100个细胞。 采用SYBR Green工染料,在PCR循环的最后通过分析融解曲线而鉴定PCR产物,因为PCR产物有特定的融解温度。针对不同组中的特定基因,这一方法被用于同步检测沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)。对29株沙门氏菌和18株单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocyto—genes)。经过过夜浓缩富集,这一方法可检测到2.5个细胞的沙门氏菌血清型和1个细胞的单核细胞增生李斯特氏菌(L.mo加cyzog鲫Ps)【¨嘲。qPCR技术也被用于E.coli stxl和stx2基因的同步检测㈣|。采用SYBR Green I荧光染料的qPCR技术被用于检测牡蛎组织匀浆和Gulf水域中的创伤弧菌,经过5 h的浓缩富集,这一方法可以检测到一个细胞,如果不经过浓缩富集,可从1 g牡蛎组织匀浆或者10 mL Gulf水中检测到102个细胞。该方法以专一性的溶血毒素基因vvh为目标,整个实验完成时间不超过8 h。Lux荧光基因 海洋细菌如费氏弧菌(Vibrio JTscheri)和哈维氏弧菌(V harveyi)的发射荧光是由基因控制的,并且发射荧光的能力可通过转移某些控制基因而使其他生物获得。编码荧光素的基因包括luxA和luxB,前者编码荧光素口亚基,后者编码p亚基。该细菌编码生物发光操纵子中的另外8个基因不必转移。荧光噬菌体在食品微生物中的应用,一种噬菌体只对特定的目的菌专一感染,因此在噬菌体和宿主之间具有高专一性联系的优点(见本章后面噬菌体分类和第二十章噬菌体部分)。如果小肠结肠炎耶尔森氏菌(y.entero—colitica)是目标菌,则特定的噬菌体只会对种内的广泛菌株专一感染,而其他即使亲缘关系很近的菌种也不会被感染。噬菌体的荧光基因是通过重组方法插入的,大小约为2 kb。它本身由于缺少发光所需的成分,因此本身并不发出荧光。当被加入到其宿主菌中时,携带有荧光基因的噬菌体进入宿主并复制
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