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食品微生物的检测-采用不同荧光标记分子
所属分类：显微镜百科 点击次数：216 发布日期：2022-06-20
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食品微生物的检测-采用不同荧光标记分子 分子信标技术(Stratagene, La Jolla, CA)是一种全新的技术，即将用于食品微生物的检测之中。在这项技术中，所有的反应会在同一个试管中完成。分子信标是一个特制的发夹形的杂交探针，它用来与目标PCR产物结合。该探针的一端结合了一个荧光基团，另一端结合了一个荧光淬灭基团。当不存在目标PC R产物时，分子信标以发夹形式存在，不会产生荧光信号。当反应生成目标PCR产物时，分子信标与PCR产物结合从而导致发夹结构伸展。这时淬灭基团远离荧光基团，荧光信号产生并被检测到。荧光信号的检测是与PC R反应同步进行的，实现了目标PCR产物的“实时”检测，进一步可证实样品中目标病原菌的存在。该系统与TaqMan系统具有相同的效率，不同之处在于分子信标直接检测PCR产物的存在，而TaqMan系统只能报告链式反应的发生。采用具有不同荧光标记的分子信标，可在同一个试管中检测不同的PCR产物，因此可以对多种目标病原菌或分子进行“多重分析”。这是一项崭新的技术，目前尚未在食品微生物检测领域普及。 PCR系统的一个主要问题是PCR产物的交叉污染。如果阳性PCR产物(例如前一次反应得到的沙门菌PCR产物)进人到下次分析的反应体系中，就会产生假阳性结果。法国巴斯德研究所(Paris, France)开发的Probelia系统试图在整个PCR反应过程中采用尿啥吮替代胸腺啥陡，以消除PCR产物的污染。所以反应管中只有A, U, G, C四种碱基而没有T。由Probelia系统得到的PC R扩增产物将是AU, GC配对，而不是常规的AT, GC配对。PCR产物与微孔板中的已知序列杂交，从而得以识别。杂交结果的检测类似于微孔板中ELISA结果的检测，也是通过颜色反应显示出来。
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