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显微镜培养箱成像细胞的温度实验图像显微镜
所属分类:显微镜百科 点击次数:190 发布日期:2022-06-20
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显微镜培养箱成像细胞的温度实验图像显微镜用括号中的任一仪器保持成像细胞的温度(例如,完全封闭的显微镜培养箱,循环水浴温度控制器,独立控制的阶段加热器,热空气对流元件)。注意:这些温度控制元件的效率和价格按照从前到后依次递减。3.各种可用的荧光蛋白极大地降低了成像的硬件要求。使用标准的激发源和滤过设备能捕获很多这些蛋白质。4.EGFP和EYFP,作为最常用的绿色荧光蛋白,能在一定程度上抵抗光漂白作用,但是在任何试验中都要考虑这种现象。应该尽可能地降低这些激发力,以延长荧光标记物的寿命。5.通常尽可能地保持蛋白质的低表达,因为很多哺乳动物表达质粒中所用的强启动子能引起荧光蛋白过表达的级联放大效应,并且荧光蛋白的桶状结构可以使其较弱[如水母(Aequoreavictoria)突变体]或者较强[如某些珊瑚和异辐海葵(Disco一50maandHeteractiscrispa)突变体]地自我交联。6.开始实验时,应考虑到整个研究的时间进程。如果实验进程很快,成像的间隔时间应该很小或为零。在这种情况下,影像扫描和影像收集也要迅速。由于信噪比会随所收集的光子数目的平方根增加(即扫描时间越长,信噪比越好),增加帧频通常可降低信噪比。由于进程较慢的研究扫描时间更长,并且有更长的时间间隔,因此可以减少这些限制。两种情况均应考虑整个激发时间以减少光漂白效应。7.使用传统的荧光显微镜技术定位目的荧光细胞后,首先调节焦距、激发水平和探测器的捕获能力,在较短的时间内扫描细胞,探测器可以从感兴趣的焦平面获取足够的信号。要尽可能快地完成这些步骤,以减轻甚至在实验开始前就开始的光漂白效应
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