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质粒DNA的提取-细菌分解的物质作碳源
所属分类：显微镜百科 点击次数：203 发布日期：2022-06-20
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质粒DNA的提取-细菌分解的物质作碳源 降解性质粒，编码一系列能降解复杂物质的酶，从而含该质粒的细菌能利用一般细菌难以分解的物质作碳源。降解质粒以其所降解的底物命名，例如降解樟脑的质粒(CAM)、降解萘的质粒(NAP)、降解甲苯的质粒(TOE)和降解二甲苯的质粒(Ⅺm)等。 质粒DNA的提取是基因工程中基本技术之一，现已有多种成熟的方案可供选择。例如，利用碱性或煮沸条件下质粒DNA与染色体DNA变性和复性的差异而进行分离。利用插入EB(溴乙锭)造成不同构型DNA，因而沉降性质不同，通过CsCl梯度离心分离。利用羟基磷灰石在特定条件下只吸附双链DNA的羟基磷灰石法。利用高盐及有SDS存在下大分子沉淀而质粒分子保持在上清液中的高浓度NaCI法。利用加热后变性与复性差异而造成质粒存在于聚乙二醇相中，等等。往往是利用玻璃纤维膜(或硅胶)吸附DNA，这时先利用碱性SDS裂解细胞，除去染色体，并在DNA复性的高盐条件下用膜吸附质粒DNA，然后用洗涤液洗去降解的RNA、蛋白质等杂质，最后用TE或无菌水等低盐条件洗脱得到质粒DNA。整个过程能在lh之内完成。且提取的质粒DNA质量高，可直接用于酶切、连接、转化、标记、测序等操作。
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