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细胞质量浓度的测定，细胞干重测定技术
所属分类：显微镜百科 点击次数：165 发布日期：2022-06-20
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细胞质量浓度的测定，细胞干重测定技术测定细胞质量浓度 直接法 对于细胞质量浓度的测定，细胞干重测定是最常用的直接法，并且仅能用于在不含固体颗粒的培养基中生长的细胞。如果存在非细胞固体物(如糖蜜固体、纤维素或玉米浆)，那么干重测量则不准确。通常培养液的样品要经过离心或过滤，并用缓冲液或水进行洗涤。洗后的湿细胞在80℃下干燥24h，然后测定细胞干重。 填充细胞体积法用于发酵液中(例如工业抗生素发酵)细胞浓度的快速粗略估计。在标准条件下(一定的转速和时间)发酵液在锥形刻度管中被离心，进而测量细胞体积。 另一种快速方法是基于样品培养基中悬浮细胞对光的吸收。光的强度用分光光度计测定。当没有其他固形物或吸光化合物存在时，测量培养液的浊度或光密度是一种快速、廉价、简单的细胞浓度估计方法。样品室中透光强度是细胞浓度和样品室宽度的函数。光的传播由吸收和散射二者来调节。有颜色的细胞与无颜色的细胞结果不同。必须考虑培养基中组分的本底吸收，特别是光吸收的溶解物进入细胞时。培养基应该基本上没有颗粒。正确的程序需要：使用培养基组分具有最小光吸收的波长(通常使用600 700nm)，和培养基相对照的“空白”，以及使用校准曲线。以光密度(0D)与干重测量的关系作校准曲线。校准曲线在高OD值时(>0．3)可能呈非线性，同时在某种程度上还与细胞的生理状态有关。
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