网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 0 实验步骤-免疫细胞化学染色法之单一染色免疫细胞化学染色法 ( immunocytochemistry)单一染色利用单一免疫细胞化学染色法（immumocytochemical staining）可鉴定本实验培养之混合神经胶质细胞的型态、种类及组成比例。以 anti-glial fibrillary acidicprotein（anti-GFAP）辨示星状胶质细胞（asatrocytes），由于星状胶质细胞含有丰富的 glial fibrillary acidic protein 故被染上的星状胶质细胞，在显微镜下可看到一丝一丝的 glial fibrillary acidic protein。而用于辨示微小胶质细胞（microglia）的有anti-ED1、anti-OX6、anti-OX42；anti-ED1 可辨示微小胶细胞细胞质内的溶小体（lysosome）一般而言，anti-ED1 可标示的是活化态的微小胶质细胞，但离体实验（in vitro）对微小胶质细胞而言，就会稍微使得微小胶质细胞被活化但其活化的程度与给 LPS 处理后相较仍有程度上之差异；从 anti-ED1 染色可看到给予 LPS处理的微小胶质细胞其外形变得比较圆、几乎看不到突起的触角（process）而无给予 LPS 处理的微小胶质细胞亦可被标示到，但显微镜下可看到其外形较细长、仍可清楚看到突起的触角。anti-OX6 辨示活化状态之微小胶细胞细胞膜上 MHCclass II 的接受器。而 anti-OX42 可辨示微小胶质细胞细胞膜上 CR III 接受器，不论微小胶质细胞是否被活化都可被 anti-OX42 标示到。当微小胶质细胞被活化时，其型态会由静止状态（resting stage）变成活化状态（activated stage），即细胞的外观会由不规则的、细长的外形且可看到突起的触角慢慢转变为外形较圆、突起的触角逐渐缩短的型态，称为（amoeboid）实验步骤1. 将细胞种于置有玻片的 24 孔培养盘中，定期更换新鲜培养液至可实验状态。药物处理后的细胞以 PBS（1X、pH＝7.4）清洗二次（10 分钟 / 次）后，加入 4% paraformaldehyde 置于室温下二十分钟以固定细胞，之后移除paraformaldehyde 再以 0.05M TBS（pH=7.6）清洗细胞。2. 加入 3% H2O2 于 0.05M TBS，置室温下作用三十分钟以去除内生性过氧化酵素（endogenous peroxidase）。3. 以 0.05M TBS 清洗细胞三次，移除 H2O2，尽可能避免泡泡产生。4. 去除非特异性的结合（nonspecific binding），将 10% normal horse serum（NHS）或 normal goat serum（NGS）,0.1% Triton X-100 加至 0.05M TBS 混合后，加入24 孔培养盘中使之足以覆盖表面，置室温下一小时。5. 移除 NHS 或 NGS，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入初级抗体置于 4℃过夜反应。6. 移除初级抗体，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入次级抗体于室温下反应一小时。7. 移除次级抗体，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入 peroxidase-conjugatedstreptavidin 于室温下反应三十分钟。8. 移除 peroxidase-conjugated streptavidin，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入DAB（5% DAB+1% H2O2）作呈色反应9. 对比染色 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！