网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 0 不同浓度的乙基雌性激素的酵母菌细胞增生测试于15mL离心管中加入3 mL培养液(SD medium-His)，自培养皿上刮取少许酵母菌加入培养液中，混合均匀，至于orbital shaker上培养隔夜。以酒精配制100 ppb 及10 ppb乙基雌二醇。取10 m L酒精、10 ppb雌二醇20 m L、50 m L ，100 ppb乙基雌二醇10 m L、20 m L、50 m L至100 mL血清瓶中，各三重複，待酒精挥发至乾，加入2 mL SD-medium-His-Ura培养液。此试验雌二醇最终浓度为0.1、0.25、0.5、1.0、2.5 ppb。取10 m L 酒精至100 mL血清瓶中，各三重複，待酒精挥发至乾，加入10 mL SD-medium-His培养液。作为此次试验的正控制组。以121 ℃、15分钟将上述培养液灭菌，待冷却至室温。将前一日培养的酵母菌，移植至上述培养液，经16、24、40、48小时取100 m L进行细胞计数。低浓度的乙基雌性激素的酵母菌细胞增生测试于15mL离心管中加入3 mL培养液(SD medium-His)，自培养皿上刮取少许酵母菌加入培养液中，混合均匀，置于轨道震盪器上培养隔夜。以酒精配制乙基雌二醇，浓度为0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50、100、200、500 ppb，取10 m L加至100 mL血清瓶中，各三重複，待酒精挥发至乾，加入10 mL SD-medium-His-Ura培养液，使乙基雌二醇最终浓度为0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50、100、200、500 ppn。取10 m L 酒精至100 mL血清瓶中，各三重複，待酒精挥发至乾，加入10 mL SD-medium-His培养液。作为此次试验的正控制组。以121大气压、15分钟将上述培养液灭菌，待冷却至室温。将前一日培养的酵母菌，移植至上述培养液，经24小时取100 m L进行细胞计数。四、结果酵母菌细胞数之定量分析将灭菌之培养液以分光光度计由波长360 nm至波长800 nm每隔20 nm读一次吸光值观察此培养液在此波长范围内有无特殊之吸光值，其结果如图一所示；培养PL3之酵母菌液的结果如图二所示。由图一与图二所见，酵母菌的培养液在波长500 nm吸光值逐渐增加，而含有酵母菌之菌液随着波长减短而吸光值逐渐增加，波长500 nm至800 nm对酵母菌个数的推估应稳定而合适，John Wiley 建议以波长600 nm作为推估酵母菌细胞个数的固定波长。在显微镜的观察下，酵母菌细胞为圆形颗粒，出芽生殖，常有许多细胞集结在一起，不易计数，在两种不同浓度菌液分别测其分光光度(OD600)，在分光光度计波长在600 nm下结果如表一所示。酵母菌液细胞个数与分光光度计吸光值线性动态范围将培养24小时的菌液连续稀释，以分光光度计波长600 nm 测其吸光值其结果如图三。酵母菌生长曲线测试酵母菌培养第3、7、22、30、48、54小时观察结果如图四所示。酵母菌细胞在培养前7个小时以显微镜观察也不易看出有增长的现象，第22小时观察时乙基雌二醇与阳性控制组已有增生的现象，至30小时后酵母菌细胞浓度不再随时间增长而有生长的现象，阳性控制组一直增生至54小时，而雌二醇一直到第48小时才观测出细胞增生的现象。酵母菌初始细胞数对细胞增生测试的影响以96孔盘观测雌性激素对酵母菌增生情形如图五、六，以乙基雌二醇做测试，其在波长600 nm的吸光值，空白试验于低细胞浓度初始值如1000或10000 cell/ well下，吸光值并没有明显增加，但是酵母菌细胞数浓度在50000、100000 cell/ well，即使没有雌性激素，吸光值仍明显高于细胞数1000 cell/ well。细胞浓度1000 cell/well在乙基雌二醇浓度0.2 ppb时有明显吸光值，但是0.2至5 ppb吸光值无明显差异p<0.05。细胞浓度10000 cell/well在乙基雌二醇浓度0.05 ppb时有明显吸光值随着乙基雌二醇浓度增加吸光值明显增加，细胞浓度50000、100000 cell/well在乙基雌二醇浓度0.05 ppb时就有明显吸光值。图六表示细胞初始浓对细胞增生试验的影响，以雌二醇为测试对象，细胞增生的数量比乙基雌二醇较少，初始细胞数为1000 cell/well时，除了在5 ppb略有增加，而其他浓度无增生的情形，初始细胞数过高，如5000 或100000 cell/well，均使空白组细胞有增生的现象，而初始细胞数10000 cell/well增生效果明显不同浓度的乙基雌二醇对细胞增生试验以不浓度的乙基雌二醇0、0.1、0.25、0.5、1、2.5 ppb及阳性控制组进行细胞增生试验，在第16、24、40、48小时进行观察，结果如图六所示。在第16小时增生还不明显，第24小时除空白组与1ppb乙基雌二醇外，均有增生的现象，随浓度增加，而增生量增加，但是24小时后随时间增加而有衰减的现象。低浓度乙基雌二醇对酵母菌增生试验降低乙基雌二醇浓度对酵母菌增生情形进行测试，浓度分别为0、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、500、500 ppn乙基雌二醇培养24小时，其结果如图七所示，一直到50 ppn才有反应，50至500ppn以分光光度计检测看不出有何差别。 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！