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广视域多光子激发萤光显微技术！一台显微镜多少钱
所属分类：显微镜百科 点击次数：197 发布日期：2022-06-20
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利用同时空间与时间聚焦(simultaneouslyspatialandtemporalfocusing)技术的广视域多光子激发萤光显微技术(widefieldmultiphotonexcitedfluorescencemicroscopy)有机会快速提供活体生物组织的三维(three-dimensional，3D)多光子萤光影像。不同于一般传统式的多光子萤光显微术需要逐点扫描，广视域多光子显微技术仅需要扫描一个轴向，也就是z轴，藉此去建构一个3D影像。本论文利用Ti:sapphire飞秒雷射振盪器(femtosecondlaseroscillator)当作飞秒雷射放大器(femtosecondlaseramplifier)的根本光源(seedingsource)，输出的120fs脉衝雷射其重覆率(repetitionrate)为10kHz，也将原先的脉衝雷射之能量提升至4.2瓦，而这样的瞬间极大能量足够去激发大于100x100μm2面积的多光子萤光信号。此外，轴向的解析度可以到达5μm以下，再利用冷却式电子倍增感光耦合器(electronmultiplyingchargecoupledevice，EMCCD)照相机来撷取萤光影像信号，其帧速率(framerate)依照不同萤光团分子的放出效率而有不同的值，其更高可达数百Hz。因此具有此飞秒雷射放大器与低温EMCCD照相机的协助，此广域多光子显微技术可以提供非常快速撷取活体生物影像，例如可以即时动态观测脑部神经细胞的活动以及肝脏的代谢等。目前此系统的纵向解析度可达将近2.5μm，也利用量测微米萤光球来推估其侧向解析度达500nm以下。另外，成功地针对脑神经细胞组织进行多光子萤光3D影像重建，目前使用EMCCD全范围1000x1000的像素其帧速度最快可达20Hz。
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