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细菌基因表现的测量
所属分类：显微镜百科 点击次数：241 发布日期：2022-06-20
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细菌基因表现的测量
目的： 利用recombinant DNA技术去选殖一个基因﹐并测试是否可用载体上的启动子
(promoter)去表现这个基因。同时，複习质体DNA的纯化。
原理：详见Recombinant DNA
有许多的载体（vector）像是pBlueScript，含有lacZ基因N端的部份，这部份往往有
multiple cloning sites，因此，有一段DNA片段插入后，就会造成lacZ基因N端无法产
生，其结果β-galactosidase的活性就会丧失。
我们就可以利用这一个特性，来帮助我们在做cloning时，作为筛选菌落内的细
菌所代的值体是否有我们要放入的DNA片段。这一方法叫做蓝白挑（blue-white
selection），这的方法缺点有二
器材：
LB+Amp and starch azure plates
Pipetman
37 ℃ incubator
10 mM MgSO4
方法：
1. 星期三下午五至六点,向助教拿有前几週基因转植的细菌细胞，分别将其接种至3ml的LB + Amp (50μg/ml)的液体培养液中,于37℃下隔夜培养。2. 取1.5ml 隔夜培养的菌液,小量抽取质体并筛检之。（参照之前的质体纯化方法-硷性溶製法，但省略步骤8-9）。3. 放到Speed Vac中乾燥10分钟，用50 µl TE去溶质体DNA，取4 µl + 1 µl 的 6Xloading dye.（已加入RNase）。4. 用电永分析质体DNA的大小，以确定是同一质体DNA。5. 将其他隔夜培养的菌液，做10-2, 10-3和10-4稀释。6. 各取2ml的三种稀释液，点在LB+Amp+X-gal, IPTG plates。
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