大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章： 图1. 传统光学显微镜的分辨率公式及阿贝极限，当两个物体之间的间距小于200nm (a)即无法分辨 图2. 共聚焦、超高分辨率与STED纳米显微镜的成像对比   1994年，德国马普研究所Stefan W. Hellf教授等提出的受激发射损耗显微镜（Stimulated emission of depletion microscopy, STED）是个突破200nm“阿贝极限”（图1）的纯光学纳米显微技术。借助STED，科学家不再必须使用电子显微镜等操作十分繁琐的方法才能观察200nm以下微观结构，能够像使用普通显微镜一样进行多色荧光成像（图2），从而大大丰富了科研工作者的研究对象（图3）。 图3. 200nm阿贝极限与生物体中的各种结构尺寸 凭借STED技术的发明，Stefan W. Hell教授获得了2006年度德国“未来奖”这一科学荣誉，2008年，《Nature》杂志将包括STED在内的超高分辨率显微技术评为年度技术，2014年，因发明STED等超高分辨率技术而荣获诺贝尔化学奖（图4）。 图4. 2014年诺贝尔化学奖获得者，中间为Stefan W. Hell教授 STED原理 使用精心设计的面包圈激光构造出小于衍射极限的荧光发射：一束聚焦的激发光与另一束中空环形的损耗光重合，利用环形焦斑使激发态上的荧光分子发生受激发射过程，剥夺面包圈部分的荧光发射能力，将荧光信号范围局限在中心很小的区域，从而改写了分辨率公式，提高光学分辨率（视频1，2）。   STED优势 STED技术具有很多优势，包括纳米级分辨率、多色观察、快速扫描、活细胞成像、厚组织标本3D重建、共定位分析等，是现代生物学和医学研究的理想工具。 STED技术是以纯光学方法提高图像分辨率，并实时成像，进行定位研究时不需要经过后期计算机软件对大量图片进行处理，原始数据就是图像。对于活细胞或活组织成像具有较高的扫描速率，可以完成生理学相关实验。此外多种荧光染料结合使用，可同时观察多个荧光信号，实现的共定位分析。   STED主要应用 研究蛋白质定位及功能 研究细胞器的活动和功能 厚组织标本的成像 细胞外小泡（EVs）的研究 核酸分子成像 …… STED成像时需要注意的问题 需要了解与使用的荧光标记分子的波长相匹配的 STED 损耗波长 对标本染色的要求一般高于激光共聚焦显微镜 徕卡STED超高分辨及纳米显微镜 作为超高分辨率成像领域的技术领航者，徕卡早在2004年就推出了全球款超高分辨率4 Pi显微镜。2007年，Leica Microsystems前瞻性地开始对STED技术进行商业化生产，并在此基础上不断推陈出新，突破极限（图5）。 图5. 徕卡STED荣获2014年R&D 100大奖和《The Scientist》2014年十大创新奖 图6. Leica超高分辨显微技术不断创新的14年     网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！