大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章： 什么是荧光寿命？荧光寿命就是荧光分子停留在激发态的时间，它是荧光分子的固有参数，不受染料浓度、光源波动、漂白等的影响，但会因为分子构象改变、分子间相互作用、分子微环境改变而发生变化，因此荧光寿命可用于分析分子的上述改变，比如大家熟悉的FRET (荧光共振能量转移)、离子浓度 (如pH值) 改变等，都可以用荧光寿命成像 (Fluorescence Lifetime Imaging，FLIM) 进行测量，对于多色或多组分荧光图像，利用FLIM也能轻松区分。 FLIM功能如此强大，但应用并不广泛，真正了解的人也不多。WHY？首先，FLIM成像太慢，采一张图至少要半分钟，无法追踪动态变化，多位点采集很困难。其次，FLIM操作复杂，采完图像需要进行数据分析，系统反应函数IRF，单指数/双指数/多指数曲线拟合，寿命，振幅，卡方值……blablabla，实在是太难理解和掌握了。 作为一个负责任、一直致力创新、和用户并肩前行的光学生产厂家，徕卡自然深深理解科研工作者的痛点。经过数年潜心研发，徕卡推出了全新的荧光寿命成像系统——SP8 FALCON (FAst Lifetime CONtrast)，它快速，简单，一键拟合，它让FRET测量不再是难题，让您弹指间实现FLIM动态成像、3D、拼图、多点采集，让您轻松实现多染料/多组分分离，它和其他LAS X模块一样直观易用，让您无需花费时间学习数据分析。 下面就让我们了解一下FALCON的应用实例吧。 1.FLIM-FRET HeLa cells expressing either GFP (donor) only or GFP-mCherry tandem (FRET pair) FRET是研究大分子间相互作用的经典方法。如上图，发生了FRET的细胞和没发生FRET的细胞相比，荧光寿命较短 (见图左下角荧光寿命标尺)，我们可以通过两种荧光寿命计算出共振能量转移的百分比。 HeLa cells expressing either GFP (donor) only or GFP-mCherry tandem (FRET pair)   2.钙震荡FLIM动态成像 (4fps, 256x256)   Ca2+ fast oscillations. OG488-BAPTA1 AM, HeLa cells. Response to thrombin activating peptide. 钙信号的传输与众多生理过程相关，通常速度很快，传统FLIM成像速度慢，无法追踪到钙的动态变化。视屏所示为SP8 FALCON以4幅/秒的速度采集的快速钙离子FLIM图像，揭示在凝血酶受体激活肽作用下，细胞内钙离子浓度迅速增高，由此引起钙离子螯合剂OG488-BAPTA1荧光寿命发生改变。 3.雏菊FLIM三维成像 Daisy Flower 视频中可见雏菊呈现不同颜色，这是因为各个组分的结构不同，其自发荧光的寿命也不同，因此可以用荧光寿命进行区分。SP8 FALCON对于多维度FLIM成像 (如本视频中的xyz三维成像、上一个视频中的xyt时间序列成像)和多组分曲线拟合游刃有余，可以轻松获取高清图像和的荧光寿命信息。 4.小鼠胚胎切片FLIM拼图 (722 tiles, 22128x8359 pixels) Mouse embryo, histology slide LAS X的Navigator智能拼图模块可对大样品进行旋转拼图、不规则拼图，速度快，没有拼接痕迹。视频即为FALCON结合Navigator对小鼠胚胎切片 (3cmx1cm) 进行的大视野FLIM拼图，全图由722个小图拼接而成，图像平滑，细节高度清晰，可见4种荧光寿命成分。这样的大视野FLIM拼图成像，在FALCON出现以前根本无法想象。 FLIM为共聚焦成像增加了荧光寿命的信息，使得我们在荧光强度成像之外，能更加深入地进行功能性测量，获取分子构象、分子间相互作用、分子所处微环境等常规光学成像无法获得的信息。而FALCON的出现，使共聚焦能以前所未有的速度进行实时FLIM测量以及大视野FLIM拼图。徕卡SP8共聚焦成像平台已经拥有了高分辨率 (HyVolution) 、超高分辨率 (STED) 、光谱式多光子 (DIVE) 、光片成像 (DLS) ……等功能，如今在单分子成像领域再添FALCON，可谓十项全能。So，SP8的强大，你get到了吗？ 网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！