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M13K07的扩增方法？下一步要提取单链DNA
所属分类：显微镜百科 点击次数：182 发布日期：2022-07-02
大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章：M13K07的扩增方法？
如题求助，因为冰箱里的M13好长时间了，想扩增一下，并于下一步提取单链DNA。谁有比较详细的扩增方法阿？不要说分子克隆上的，那个有点乱。
1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。
2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。
3从噬菌体培养皿中挑取单个噬菌体(VCSM13或M13KO7)空斑，接种入上述10ml菌液中，37℃振荡培养2h
4加入SB培养液，含有10μg/ml四环素和70μg/ml卡那霉素，或2×YT培养液，含有70μg/ml卡那霉素，总量至500ml，37℃振荡培养过夜。3 500~4 000r/min 4℃离心15min。
5取上清，于70℃裂解20min,再次离心(此步可省略)。
6取上清，无菌分装小管中，每管10~20ml,存放4℃至少可使用半年。
大概就是这么做的 然后看你是什么菌
我用的是xl1-blue，四环素抗性的，我想知道所有这些步骤里都加四环素还是只有开始挑单菌落培养的时候才加？
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