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抽提动物细胞的DNA的方法和步骤？-生物显微镜厂家！

材    料：

液态氮

Digestion buffer

[配方]100mM NaCl          10mM Tris.Cl,pH8

25mM EDTA, pH8      0.5﹪sodium dodecyl sulfate

※      0.1mglml proteinase K(proteinase K必须在每次使用前才加入以保有效)

4℃ Phosphate-buffered saline (PBS)

[配方]10X储存液：

每公升中含--80g NaCl              2g KCl

11.5g Na2HPO4.7H2O     2g KH2PO4

使用液(工作液)：

pH7.3--137mM NaCl       2.7mM KCl

4.3mM Na2HPO4.7H2O       1.4mM KH2PO4

25：24：1 Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol

7.5M ammonium acetate

100﹪及70﹪ethanol

TE brffer pH8

方    法：

1.     将动物组织切下, 迅速放入液态氮中, 待组织冻硬, 立即磨成粉状.

2.     每100mg组织加入1.2ml digestion buffer. (若係用组织培养细胞, 则离心1000rpm, 5min, 沉淀细胞, 再以PBS洗细胞二次, 离心除去PBS, 再将细胞溶在digestion buffer中, buffer的用量为每108细胞用1ml).

3.     将组织或细胞放在digestion buffer中, 在50℃, 振盪12hr.

4.     以等体积的Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol提取DNA.

5.     离心2,500rpm, 10min, 上清液中为DNA. (若中间层的白色物质量多, 可重複此提纯程序)

6.     将上清一转至另一离心管中, 加入1/2倍体积量之7.5M ammonium acetate, 及上清液量2倍之100﹪ethanol, DNA当很快析出. 再以离心2,500rpm, 2min, 沉淀DNA, 倒去上清.

7.     用70﹪ethanol洗DNA, 以去除盐分及phenol, 倒去酒精, 使DNA乾燥.

8.     将DNA溶入适量TE中, 可将离心管放65℃并缓缓振盪, 以加速溶解.

9.     将DNA保存在-20℃(以1mg/ml为佳).

预期结果：每克动物组织或每109个细胞约可得2mg DNA.