细胞学-桑椹胚及囊胚细菌培养实验观察用显微镜
所属分类:新闻资讯 点击次数:3 发布日期:2026-04-20
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桑椹胚及囊胚细菌培养实验观察用显微镜桑椹胚(Morula)与干细胞的聚合实验仪器 1. 解剖显微镜 2. 37℃,5% CO2 培养箱材料 1. 授精 2.5 天之母鼠 2. 解剖用具 3. 细菌培养皿 4. M2 及 M16 培养液 5. Acid Tyrode's Solution (Sigma T-1788) 6. 矿物油 (Sigma M8410) 7. ES cells 8. Aggregation needle (DN-09, BLS, Hungary) 实验步骤 1. 以 aggregation needle 在细菌培养皿上,钻出适当大小的洞;于洞上滴上 M16培养液滴, 并以矿物油覆盖。 2. 将培养皿放入 37℃, 5% CO2 培养箱备用。 3. 另取一 35mm 培养皿,制备 M16 培养液滴,并以矿物油覆盖。 4. 取授精 2.5 天之母鼠,剪取输卵管与相连之部分子宫,于 M2 液滴中清洗; 于解剖显微镜下,用 M2 培养液,于输卵管开口,以 30 号针头冲出 morulae。 5. 以口吹式毛细管收集 morulae,于 M2 液滴中清洗,置于含 M16 之 35mm 培养皿中培养备用。 6. 取出 ES cells 培养皿,PBS 清洗三次,以 0.05% trypsin 37℃ 作用 30 秒,以培养液中和trypsin 并打下 细胞,800rpm 离心 5 分钟,吸除上清液后以培养液打散细胞。 7. 于显微镜下以毛细管挑取适当的细胞团 (约 8~10 颗一团),于 M16 液滴清洗后置入先前制备之 培养皿洞中(每洞一团细胞)。 8. 于另一培养皿中点上 M2 及 acid tyrode's solution 数滴。 9. 取出 morulae 置于 acid tyrode's solution 中作用数秒,待透明膜溶解后,立即取出置于 M2液滴中清洗。 10. 将去膜之 morulae 置于含 ES cells 细胞团之洞中(每洞两颗),成三明治堆叠状
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