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酵母菌和霉菌琼脂培养基过夜培养分析显微镜
所属分类:显微镜百科 点击次数:631 发布日期:2022-06-20
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酵母菌和霉菌琼脂培养基过夜培养分析显微镜疏水格栅滤膜过滤器 疏水格栅滤膜过滤(hydrophobic grid membrane filter,HGMF)技术是由Sharpe和MichaudE¨8’¨9]发明,随着它被进一步的发展,用于各种食品中微生物的检测计数。这种方法使用了一个特殊构造的过滤器,在这种膜过滤器的一面包含了1 600个蜡状的格栅,每一个格栅都能够限制菌落的生长和大小。每一个膜过滤器,可以利用MPN自动计数口…,计数范围在(10~9)×101。这种方法能够检测的细胞下限数为10/g,大约24 h内完成口“]。HGMF用于检测计数所有的cfus和特殊的菌群凹J“”],如真菌类(fungi)。17]、沙门氏菌‘”o和假单胞菌[6“。AOAC认可了大肠菌群总数、粪大肠菌群菌、沙门氏菌、酵母菌和霉菌的HGMF方法。用于真菌的ISO—GRID法,使用了一个特别的培养基平板:含有两种抗细菌抗生素和锥虫蓝(trypan blue)。后者使真菌菌落染成蓝色,在48 h内能够检测下限数值为10 cfu的菌落数。 HGMF典型的应用是将1 mI。的1:10的样品液通过过滤膜过滤,然后把这个膜放置在一个适合的琼脂培养基过夜培养,让菌落生长。用MPN法计算生长菌落的格栅。这种方法允许每张过滤膜过滤l g食品样品[1】7]。对于食品中大肠杆菌(E.coli)的检测,SD-39琼脂ISO—GRID法比4一甲基伞形基一pD一葡萄糖苷酸(4-methylumbelliferyl一/3-D—glucuronide)琼脂协同LMG(1actose monensin glucur—onate)琼脂ISO—GRID法具有更好的通用性;尽管后者能够灵敏地检测大肠杆菌(E.coli)0157:H7和MUG阳性菌株¨“。SD-39琼脂法能够在24 h左右产生结果,灵敏度<10,而LMG法需要大约30 h。 对5个试管的大肠菌群分别进行MPN和HGMF同步计数,大肠菌群和粪大肠菌群在计数上具有相同的结果n…。在进行HGMF检测时,首先,HGMF过滤膜被放置在胰酶解酪蛋白一黄豆琼脂培养基上,35℃,培养4~5 h(目的是为了修复受损的细胞);随后,把它移到m—FC琼脂中再培养。基于酶标记抗体(enzyme—labeled antibody,ELA)操作的HGMF已经得以发展,主要用于食品中致病性大肠杆菌0157:H7(hemorrhagic colitis,HC;出血性肠炎)菌株检测口26]。这种方法使用了一种特殊培养基平板,能够保证HC类型菌株在44.5℃生长。这种特殊的琼脂培养基仅含有0.113%#3牛胆盐,而HC琼脂培养基中含有0.15%。该方法的能够检测出绞细牛肉中的大约90%的HC类型菌株E124]。HGMF—ELA法使用HC琼脂43。C、培养16 h,冲洗掉膜上的菌落,将膜浸入单克隆抗体一一辣根过氧化物酶一蛋白A联合体的封闭溶液体系中。这种方法,EI。A阳性菌落呈紫色,95%的HC类型菌株能在24 h内测出,且在肉中的检测到HC菌株的极限达到10 cfu/g。
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