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酚细胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技术之一
所属分类：显微镜百科 点击次数：214 发布日期：2022-06-20
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酚细胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技术之一 核酸的分离 在细胞裂解及核酸酶灭活之后，细胞碎片可通过过滤和I沉淀的方法去除，但残留在溶液中的其他小分子和蛋白必须与核酸分离。．目前常州的几种核酸提纯的方法包括萃取法、沉淀法、膜滤法、色谱法、吸附纯化法以及电泳法，有时要同时应用多种提纯方法以得到所需纯度的核酸二核酸提纯的困难之处在于去除与目标核酸具有相似理化性质的物质，经研究这类物质包括脂多糖、RNA或者线粒体DNA：大部分基因组DNA在裂解过程中变性沉淀，所以在后续的步骤中需要去除大量的RNA和蛋白质在非分析类的应用中，核酸的分离提纯方法同样非常重要，如基因治疗以及培养产药质粒，这些方法都有类似的步骤：从宿主细胞中分离质粒，然后进行净化、富集，最后提纯质粒， 溶剂萃取沉淀法 使用酚进行细胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技术之一，在第六、七章中已做陈述。悬液中的单细胞经过去垢剂处理后，再加入蛋白酶以水解其中的蛋白分子。非核酸成分萃取到酚一氯有机溶剂层中，而核酸分子则残留在水相中。分离水相并加入两倍体积的异丙醇，相对分子质量大的核酸会形成白色细丝状沉淀，然后使用不含DNA酶的核糖核酸酶(RNA酶)去除RNA。重复上述步骤，加入蛋白酶、苯酚萃取、异丙醇进行二次处理，沉淀后加热煮沸或者离心样品，并用乙醇洗两遍分离纯DNA，即可得到纯净白色丝状的DNA
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