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细胞外基质(ECM)的载玻片上的迁移速度实验
所属分类：显微镜百科 点击次数：145 发布日期：2022-06-20
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细胞外基质(ECM)的载玻片上的迁移速度实验按一定密度将细胞加于牵引实验底物上，不要使细胞互相接触，但应加入足够于测量的细胞。在室温条件下培养1～3 h，直至细胞恢复正常形态和迁移速度。将细胞悬液注在二甲聚硅氧烷膜一侧，使其流向另一侧，以便迅速覆盖二甲聚硅氧烷膜。此步骤引起的膜破裂最少。正常的迁移速度常指在涂布一层某种细胞外基质(ECM)的载玻片上的迁移速度。6．将盛有细胞的Petri皿放于显微镜载物台(可实现温度控制)上，记录细胞对二甲聚硅氧烷膜产生的皱褶。先记录图像视野的校准尺度，然后以此校准尺度直接测量皱褶长度，或用装有图像捕获器和图像分析软件的计算机测量。7．将铺有底物的盖玻片(无细胞)封固于含有培养液的Petri皿内，再将培养皿放于装有录像系统显微镜的载物台上。然后，将带有持针器的显微操作仪安置在合适位置，以便针尖可达理想视野的中央。8．将已校准的微型针固定于显微操作仪内，用显微操作仪将微型针在二甲聚硅氧烷膜上向侧面移动，直至产生皱褶，这些皱褶比细胞产生的皱褶短或长。9．通过校准的录像记录，确定针尖产生皱褶(长度)时的移动距离。记录录像视野的校准尺度，然后按此视野尺度计算针尖产生皱褶前后的移动距离(同步骤6)。10．对于每条皱褶的长度，应按针的不易移动性(见支持方案1)和偏向计算产生皱褶的力，由此得出力一皱褶长度曲线。11．用步骤10得出的力一皱褶长度曲线计算产生皱褶(步骤6测量的)需要的力。支持方案1 校准微型针材料直径为25 tzm的镍铬热电偶线(omega engineering)移液管拉制器(David Kopf instruments)各种直径和壁厚的Pyrex毛细玻璃管(drummond scientific)小显微镜，光轴平行于工作台目镜网格(edmund scientific)，校准尺度适合于显微镜的目镜。1．剪一段直径为259m的镍铬线(长约30 cm)，然后称重，并仔细测量长度。根据此重量／长度比率，得出较短一段镍铬线(将用于步骤3)的质量。
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