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细胞牵引力细胞在迁移过程中对底物产生牵引力
所属分类：显微镜百科 点击次数：141 发布日期：2022-06-20
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细胞牵引力细胞在迁移过程中对底物产生牵引力 细胞牵引力细胞在迁移过程中对底物产生牵引力，这种牵引力可在整个细胞或细胞局部下面检测。基本方案1 检测细胞在起皱底物上的牵引力材料目的细胞对目的细胞专用的培养液，不含酚红，添加20～50mmol／L HEPES二甲聚硅氧烷无酚红培养液，用家用真空器除气显微镜载物台温度控制系统(或头发吹风机和控制器)盖玻片，用酸洗过Petri皿，比盖玻片稍大配有录像系统的倒置显微镜(装有长距离工作目镜)或正置显微镜(装有多液体浸渍目镜)显微操作仪(可作三维调节，如Nanishige)，装有持针器(World Precision In—struments)已校准的微型针计算机，装有合适的电视图像捕获卡和图像分析软件(如NIH Image，可用匿名Macintosh计算机，装有Scion图像捕获运行器1．将二甲聚硅氧烷液注于干净的盖玻片上，扩展形成一薄层，厚20～50微米。将本生灯炉头的燃料气体量调至最小。然后，将盖玻片的二甲聚硅氧烷液面朝下，用镊子夹持盖玻片，使盖玻片穿过火焰上部约1．5s。交联时间会影响二甲聚硅氧烷片的硬度。本方法的典型交联只发生在二甲聚硅氧烷液的最上层(厚1微米)。聚硅氧片自然形成许多皱褶，变得不透明。但是，聚硅氧片冷却时，在5～20s内变得透明。*厘沲，运动黏度单位。2．如果细胞不是在室温条件下培养，在用于测量的显微镜载物台上调整好细胞培养温度。3．用不含酚红且添加20～50 mmol／L HEPES的常用培养液接种细胞或分离原代细胞。4．如果细胞可以传代，用胰蛋白酶和EDTA混合液轻度消化细胞(单元1．1)，从而自培养器皿内取出细胞。然后，加入较多的添加HEPES和血清(或BSA)的除气无酚红培养液，使胰蛋白酶失活。用同样培养液混悬细胞。5．将盖玻片放入Petri皿(稍大于盖玻片)，液体面朝上。向Petri培养皿加入除气培养液，深度≥o．5 cm。
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