网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 0 含有编码荧光蛋白DNA的质粒检测电子显微镜程是相似的。荧光蛋白嵌合体通常在N端或C端加入融合结构。2．获取目的蛋白N端或C端结构一功能的知识将有助于避免干扰母体蛋白的功能和／或  定位。而且，了解每个末端表达定位的亚细胞环境对嵌合体的设计将是有用的。例  如，如果可能的话，避免把GFP加入到酸性蛋白水解环境中的蛋白末端(如溶酶体  内腔)，如果没有相关知识，最初可制备N端和C端都连接GFP的嵌合体。3a．末端插入连接子：如果N端和C端都包含决定目标蛋白功能和定位的结构域，则    在它和荧光蛋白之间插入短的连接肽以减少位阻的影响。3b．包埋插入：也可以把荧光蛋白插入到分子的基本序列中，通常在未结构化的环形    区域内。如果其他方法失败可考虑此种方法，但不能保证成功。4．某些情况下，把编码荧光蛋白的eDNA插入含有编码目标蛋白DNA的质粒更容易。  此时，根据目标蛋白是N端融合还是C端融合，应格外注意荧光蛋白的5’端和  3’端。5．如果产生的是N端融合(指GFP连接到目标蛋白的N端)，贝Ⅱ必须合理设计GFP  编码区域的两个末端。把Kozak序列和GFP翻译起始密码子结合起来将会保证  mRNA的高效翻译，同时应该删除GFP的终止密码子或者将其转化成编码氨基酸。6．如果产生的是C端的融合，则删除目标蛋白的终止密码，或者将其转化为一个编码  氨基酸；保存GFP的终止密码子。7．另外也可以把编码目标蛋白的cDNA插入到含有编码荧光蛋白DNA的质粒中。在  很多情况下，这种方法更简单，因为许多可以表达荧光蛋白的质粒可以买到。这些  质粒通常包含一个巨细胞病毒(CMV)连接的早期启动子(在哺乳动物细胞内高效  表达)，一个包含了许多独特的限制性核酸内切酶识别位点的多克隆位点(MCS)  (促进嵌合体的产生)，一个可使质粒在细菌种选择性扩增的具抗生素抗性的区域，  通常包括G418筛选基因。与上面所描述的荧光蛋白的插入一样，目标蛋白插入到  这些质粒中也具有同样的限制。8．如果产生的是C端融合，则把目标蛋白的eDNA插入到一个荧光蛋白编码序列的5’  端含有MCS的质粒中。删除目标蛋白的终止密码子，或者将其转化为一个编码氨基  酸，插入一个含有目标蛋白翻译密码子的Kozak序列。9．如果产生的是N端融合，则把目标蛋白的eDNA插入到一个荧光蛋白编码序列3’端  含有MCS的质粒中(荧光蛋白编码区的翻译起始段含有Kozak序列)。删除荧光蛋  白终止密码子，或者将其转化为一个编码氨基酸；保存目标蛋白的终止密码子。 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！