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浓度的凝胶相比样品对比分析图像显微镜
所属分类：显微镜百科 点击次数：201 发布日期：2022-06-20
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浓度的凝胶相比样品对比分析图像显微镜在梯度凝胶中分离蛋白质 与均一浓度的凝胶相比，聚丙烯酰胺浓度呈梯度增加的凝胶能分辨的蛋白质分子质量范围更宽，特别是小分子质量范围的蛋白质条带更为清楚。与均一凝胶不同，梯度凝胶分离蛋白质更容易描绘出分子质量为10～200kDa的线性曲线，这更有利于计算蛋白质的分子质量。 硫酸铵，丙烯酰胺重溶液应一直保持冰浴，以防在使用时因加入了过硫酸铵而发生 聚合。在梯度胶混合器的输出阀和两液槽之间的连通阀处于关闭状态时，制作一块 0．75 mm厚的凝胶，在储液室加入7 m1丙烯酰胺凝胶轻(低浓度)溶液。3．稍稍打开连通阀，让少量(约200“1)轻溶液通过阀门流入混合室。在混合室中加 入7 ml丙烯酰胺凝胶重(高浓度)溶液。向两液室的丙烯酰胺溶液中加入特定量的 过硫酸铵，且每7 ml溶液加入约2．3“l TEMED，并以一次性吸管加以混匀。4．完全打开连通阀。打开磁力搅拌器，调整速率使混合室中液体稍起漩涡即可。5．慢慢调节输出阀，调流速至2 ml／min。6．从夹层的顶部加入凝胶液体，将吸头对着夹层的一面使液体紧沿一片玻璃平板而下， 重的液体先流入夹层，接着是逐渐越来越轻的液体。待轻溶液全部流人输出管时， 要加倍注意，并调整流速以保证最后的少量液体不会很快地流入夹层以致扰乱梯度。7．在梯度胶的顶部加入水饱和异丁醇，让凝胶聚合1h。
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