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用光密计量学定量影像和用磷光成像在凝胶中直接检测
所属分类：显微镜百科 点击次数：189 发布日期：2022-06-20
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用光密计量学定量影像和利用磷光成像在凝胶中直接检测 单元7．7介绍了免疫印迹的实验方法(也称为Western blotting)。在该技术中，通过单元7．1中所述电泳技术分离得到的蛋白质被电泳转移到一个薄膜之上(“电印迹”)，该薄膜就成为聚丙烯酰胺凝胶的一个复本，随后用带有特定蛋白抗体的探针进行检测。一抗可通过和125I标记的二抗或蛋白质A一起孵育，自显影后显像(单元7．8)。近年来，放射性碘标记抗体方法已逐渐被非放射性的酶偶联抗体如碱性磷酸酶或辣根过氧化酶(单元4．4)方法所取代，通过酶作用于底物将其转化为有色、发光或具有荧光的物质。非放射性的方法与放射性的方法具有一样的敏感性，其更大的优势在于不需要在使用放射性时进行特别的防护。非放射性的检测是现今肉眼观察免疫印迹蛋白质的可行方法。非放射性方法的缺点是它们检测的线性范围比较狭窄，同时该方法必须要求的蛋白质定量，可能也是该技术存在的另一个问题。 如何利用放射性自显影的方法使电泳分离的放射性标记的蛋白质和碘标记抗体或蛋白质A免疫印记检测到的蛋白质显像的方法。该技术利用放射源发出的射线使光学胶卷显影以达到显像的目的。在该技术中，可采取增强显示或使用发光化合物的方法提高敏感度，使放射性吸收基团发光从而形成影像。这一节介绍了几种不同放射源自显影的检测方法，以及用增强显示或使用荧光以增强信号的方法利用光密计量学定量影像和利用磷光成像在凝胶中直接检测和定量放射性样品的方法
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