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电泳分离得到的蛋白质能够直接通过凝胶染色显色
所属分类:显微镜百科 点击次数:215 发布日期:2022-06-20
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电泳分离得到的蛋白质能够直接通过凝胶染色显色过程分别以电荷和分子大小为基础分离蛋白质,从而能够在单一的双向凝胶中分辨几千种蛋白质。单元7.3中阐述了利用双向等电聚焦/SDS-PAGE分离蛋白质的一些方法。除此之外,这一单元还介绍了一种双向非还原/还原电泳的方法,即蛋白质在向非还原条件下和第二向还原的条件下进行sD孓PAGE的分离。这一类型双向凝胶电泳能够分析分子内含有二硫键的多种蛋白质复合物。这两类双向凝胶电泳既可作为分析,又可作为制备之用。为进一步分析或纯化蛋白质,也可用单向IEF平板凝胶进行蛋白质的分离。 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的局限性是蛋白质的分子质量要小于300 000Da。大的蛋白质或多种蛋白质复合物的电泳分离需要使用其他的凝胶基质。琼脂糖是比较合适的基质,它普遍用于DNA的分离。利用琼脂糖凝胶电泳分离蛋白质的方法。除了能够分离非常大的蛋白质,这些方法还能分析多聚物或聚合体。虽然这些过程也能够通过蔗糖梯度离心(单元6.2)或凝胶过滤(单元6.3)进行分析,但是琼脂糖凝胶电泳更便于对大量的样品进行分析。 电泳分离得到的蛋白质能够直接通过凝胶染色显色。对四种基于不同原则的对凝胶中的蛋白质染色的方法进行了介绍。这些染色过程包括考马斯亮蓝染色、银染、SYPR0 ruby染色和锌染。这一节介绍了基本的实验方法并对如何选择高效的方法提供了指导。
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