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酶即不易失活,磷酸盐缓冲液最接近于生理液体
所属分类：显微镜百科 点击次数：121 发布日期：2022-06-20
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酶即不易失活,磷酸盐缓冲液最接近于生理液体当细胞破裂，将酶从其中分离出来以后，这些条件都不存在了，于是在人造的缓冲液中，就面临氧化、变性、以及活性部位遭受外界因子的破坏。此外，酶也很容易为失去控制的蛋白酶所分解。为了保持酶的活性，举凡缓冲液的浓度、pH、温度、辅因子、活性稳定剂等种种因素都需加以考虑，但原则上以尽量能恢复到细胞中原来的天然环境为准则。 缓冲液和pH的控制 以适当的缓冲液来控制pH是保持酶活性的最基本条件。细胞里的pH一般都在6—8之间，所以如能把pH维持在这个范围之内，酶即不易失活。磷酸盐缓冲液最接近于体内的生理液体状态，所以最为常用。但是带有多个负电荷的磷酸根在浓度过高时，有时对酶会发生抑制作用，这点要加以考虑。 酶活性的测定与保持 无论在分离酶的过程或酶被提纯以后，都要随时测定酶活性，算出酶的比活性，用以观察分离过程中各步细节的效能，粗酶的取舍，及贮存期酶质量的变化。酶活性的测定乃酶动力学在实际方面的应用。酶在不适当的环境下极易失活，所以如何才能保持酶的活性长期不变，或缓慢地失活，是在分离酶时所必须解决的问题。 影响酶活性测定的因素 由酶的动力学研究。知道酶活性和底物、激活剂与抑制剂的浓度、缓冲液的种类和浓度、pH、温度、以及酶本身的浓度都有关系。通常都尽量在最适当的条件下测量酶的活性，以求达到更大的酶反应速度 不过限于种种原因，如底物的溶解度太低，或售价太高，或有时尚需要其他连锁的酶反应来辅助酶活性的测定，则这时必须对酶活性测定的条件作适当的修正，方符合实际的需要。 底物浓度、激活剂及抑制剂 酶反应在底物的浓度达到更高的合理浓度时会得到它更大的活性。
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