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反射式荧光显微镜的一些应用-光学仪器常识
所属分类：显微镜百科 点击次数：241 发布日期：2022-06-20
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单分子侦测因可呈现动态行为与动力参数的真实波动与分布、可进行蛋白质反应事件操纵与反应之定量分析、且反应毋须同步，故为生物分子研究之重要且实用的方法。而所谓单分子荧光显微术，乃是利用适当波长的激光，激发所选择的荧光标识分子，透过对荧光标识分子的侦测与观测，追踪目标分子的动态行为。 主要是关于建立一套稜镜式全反射显微荧光显微术系统，以进行单分子研究。全反射显微术成功的关键，在于有效地降低背景荧光值。全反射在界面所建立的渐逝场，其强度为入射光能量的数倍，并随离界面的距离增加而呈指数性衰减，其渗透深度颇为狭窄，仅侷限于界面附近0.1微米的带状区域，故能选择性激发临近界面的荧光分子。渐逝场中的荧光标记分子经激发所放出的荧光讯号，经高数值孔径的物镜收集后，分别以电荷耦合元件（CCD）及雪崩式光二极体（APD）侦测。电荷耦合元件的优点在于空间的解析与多个单分子资讯的同时撷取，雪崩式光二极体的优点在于时间解析度，可用于单频道或双频道的光子计数，以进行时间系列的解析。
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