网站网友点击量更高的文献目录排行榜： 点此链接 真菌培养实验步骤主要是？显微镜价格实验步骤 :A.真菌之培养1.利用silicone stopper (00号)先钻孔，再塞脂棉，以作为 2ml microfuge tube 之真菌好气培养之用途。2.取2ml microfuge tube，加入0.5 ml 之YM broth，塞紧上述之silicone stopper。3.置放于试管架以autoclave (121℃ / 15 min.)灭菌15分钟，并以非常缓慢的方式排气，以防silicone stopper弹开。4.冷却后，在无菌操作台以接种铒由保存之菌种( Aspergillus oryzae)接入分生孢子，塞紧后以28℃培养3~5天。B.真菌Genomic DNA之分离1.取出silicone stopper 放入75%之酒精溶液杀菌，盖紧 2ml microfuge tube 本身之盖子，之后(1).以Vortex 振盪或用Tip将管壁上的菌丝拨离，再利用离心机(10000 rpm) 离心3分钟；(2).用 micropippet 吸取1 ml 的上清液并将之舍去不要，之后加入 1 ml 无菌水，经Vortex 振盪后再利用离心机(10,000 rpm) 离心3分钟；(3).步骤同1-(2)，即用 micropippet 吸取1 ml 的上清液并将之舍去不要，之后加入 1 ml 无菌水，经Vortex 振盪后再利用离心机(10,000 rpm) 离心3分钟。2.离心后，倒除上清液，放进一支已灭过菌的研磨棒稍作搅拌，来把菌丝团分散，手戴棉手套(以防止冻伤)，之后把菌丝团连同 2ml microfuge tube 以镊子挟住放入液态氮中作菌丝冻结，取出后，转动研磨棒来研磨菌体。3.取出研磨棒后，于microfuge tube内加入400μL AP1 buffer 及 1μL RNase A solution，把microfuge tube的盖子盖上后，用Vortex 振盪后，把microfuge tube插进有孔洞的保丽龙板上，再将插有microfuge tube的保丽龙板置于65℃的水浴中，保持15分钟，而其中每2-3分钟要将microfuge tube拿出稍作摇盪(可用手指弹)，要注意的是，在每2~3分钟将tube拿出稍作摇盪所花费时间要扣除，即不能算在15分钟内→ 此步骤是为了将细胞及细胞核水解掉,以释出DNA。(注意！在15分钟的等待过程中，可以拿盒子去制冰机那儿盛装一些碎冰，因为下一步骤4马上要作冰浴的动作。当第3步骤结束后，可先将第10步骤中所需的AE buffer 放入65℃的水浴中加热保温)。4.将microfuge tube从65℃的水浴中取出后，加入130μL AP2 buffer，把microfuge tube的盖子盖上，稍作上下摇晃混合后，利用刚刚盛装的碎冰作冰浴的动作，需保持冷却5分钟。5.将混合的液体倒进过滤管(shredder column)中(因为在此我们采用的是QIAGEN DNeasy Plant Mini Kit中的column，而这一类的column是装在2 ml collection tube内的，即column与collection tube是一套的)，用离心机(10,000 rpm)离心2分钟。即经过column流出的滤液是装盛在下面的collection tube中。6.离心后，取出过滤管(置灭菌袋)，并将滤出在 2 ml collection tube的滤液中吸取340μL 至一个新的1.5 ml microfuge tube，之后加入170 μL AP3 buffer 及340 μL 95%酒精 (注意：酒精与AP3 buffer的比例要 2:1，而加入95%酒精是为了让DNA沉淀)，并用吸管上下吸取作混合(此时混合的体积共有原来340μL 的滤液 + 170 μL AP3 buffer + 340 μL 95%酒精 = 850μL 的混合滤液)。7.将850μL 的混合滤液以spin column分二阶段进行DNA吸附：(1).将microfuge tube内混合的滤液先吸出650μL 至spin column中(这里的spin column也与一2 ml collection tube成套的，即spin column是装在2 ml collection tube中)，用离心机(10,000 rpm)离心1分钟。将离心后滤出在 collection tube的滤液丢弃 (但是此时还不要把collection tube丢掉)；另外，注意千万不要也把spin column丢掉，因为我们要的东西是吸附在spin column上。(2).再取出步骤6 microfuge tube内剩馀的混合滤液约200μL (即850μL 混合的滤液 –之前吸出的650μL滤液= 200μL 滤液) 倒进原来步骤7-(1)的spin column 中，之后用离心机(10,000 rpm)离心1分钟。我们要的东西是吸附在spin column上。8.将流出的滤液连同collection tube一起倒掉，之后将spin column 装进一新的2 ml collection tube中，加入500 μL AW buffer，再用离心机(10,000 rpm)离心2分钟。9.倒掉滤液(但是collection tube本身不要丢弃)，再于spin column中加入500μL AW buffer，再用离心机(10,000 rpm)离心2分钟。取出spin column (而此时可将collection tube丢掉)。10.将spin column再装进另一新的1.5 ml microfuge tube中，之后加入50μL 事先于65℃保温的AE buffer (为了要溶解原先吸附在spin column上的DNA)，把盖子盖上后，继续在65 ℃中保温5分钟，再利用离心机(10,000 rpm)离心1分钟。如此即可在microfuge tube内得到DNA，再将DNA放置 -25℃ 以下的温度作保存。 关注页面底部公众号，开通以下权限： 一、获得问题咨询权限。 二、获得工程师维修技术指导。 三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。 四、请使用微信扫描首页底部官方账号！