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GUS分析测量每个时间点其405奈米的吸光值
所属分类：显微镜百科 点击次数：250 发布日期：2022-06-20
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GUS Assay1. 于冰上解冻细胞溶解物2. 新鲜製备GUS分析缓冲液并预温至37°C3. 准备可弃式比色管 (至少每个测试三管) ，每管加入800微升 0.4M碳酸钠 (反应终止溶液)4. 每个样本准备一2ml含800微升如上述之GUS分析缓冲液的微量離心管。加入200微升细胞溶解物 (这使得PNPG终浓度为1mM) 记錄时间5. 将反应置于37°C并记錄时间 (注: 使用恆温水槽是较好的，但一致性是要点) 。注意黄色的产生 (p-nitrophenol)。于不少于三个时间点 (如15、30、45分) 由每个样本取出100微升置于比色管 (当分析粗製的细胞溶解溷合液时，将反应试管離心取100微升上清液置于比色管) 。将反应试管短暂的漩涡式震盪后，迅速至回37°C。时间点无须等间隔，但一定要记錄时间。6. 测量每个时间点其405奈米的吸光值对比于终止之空白反应 (注: 形成的颜色于终止溶液中是稳定的；如果你同时测量所有时间点的反应而非再每个时间点测量时，会有少许误差)
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