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GUS分析之溶解细胞的步骤！显微镜哪有卖找北京上光仪器
所属分类：显微镜百科 点击次数：286 发布日期：2022-06-20
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溶解细胞8. 于冰上解冻沉淀的细胞9. 重新悬浮于374微升之 B-PER™ 细菌蛋白质萃取试剂 (Bacterial ProteinExtraction Reagent – Pierce产品78248) ，与萃取细菌用的之蛋白酶与磷酸酶抑制剂混合溶液50微升 (Sigma产品 P8465，配製时參阅使用說明) ，1微升34mg/ml chloramphenicol (溶于甲醇) ，6微升10mg/ml 溶菌酶 (请以蒸馏水新鲜製备，大肠杆菌可略去此成分)
10. 漩涡式震盪1分11. 于冰上静置5分12. 此时，你所得到的是粗製的细胞溶解混合液，可于下一节流程中分析GUS活性所得之活性即以OD600每单位吸光值下每分钟产生多少nM的产物表示(对Corynebacterium 与 Rhodococcus而言，这是你使用这溶解流程所能获得的更佳结果)13. 针对大肠杆菌的样本，将粗製的细胞溶解混合液離心并置于冰上 1分钟14. 此时，你所有的是清澈的细胞溶解液(不含细胞残渣的上清液) 。其蛋白质浓度可以Bradford分析法测量 (參考另一个实验方法) 。清澈的细胞溶解液可以下一节流程分析其GUS的活性，其活性即以600奈米吸光值下每毫克蛋白质产生多少奈莫尔(nM) 的产物表示 (注：每毫克蛋白质中的酵素活性是比以OD600每单位吸光值的酵素活性较好的表示法。想想看)
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