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组织切片显微镜观察的技巧?显微镜小知识!
所属分类:显微镜百科 点击次数:288 发布日期:2022-06-20
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石蜡切片观察目的 学习组织切片观察的技巧原理 石蜡切片的原理是将样本的组织灌入石蜡,使得其质地像石蜡一般(想想化石形成的原理),才能既而将其切成约10μm的薄片而不损坏样本的构造形状。样本应依序经由1)固定.2)脱水3)包埋.4)切片.5)染色及6)封片等步骤製作成可观察及保存的玻片标本.材料 美国螯虾1公分的幼虾(或其他没有过硬外骨骼之小样本皆可)设备 rotary microtome(迴旋式切片机)water bath(水浴槽)hotplate(加热板)light microscope(光学显微镜)真空抽气机(可定温)石蜡填充机数位相机电脑及影响编辑软体slide, coverslip染缸若干玻片架若干药品 Mayer's glycerol albumen(蛋白胶)Xylene(histosol)(清洗剂-脱酒精,使组织透明化)70%,80%,95%, alcohol(脱水剂)EosinMayers haematoylinesynthetic mount(封片胶)石蜡步骤 1. 固定: 在实验开始前1-3天将活的标本浸泡于福马林(formalin)中固定,若样本有外骨骼,体积又相对的较大(1cm)时可以细解剖刀片在其表面划几刀使福马林较易渗入。2. 脱水: 依序由低浓度到高浓度(最后为)的酒精渐进脱水70% alcohol 1.5hr80% alcohol 1hr95% alcohol 1hr95% alcohol 1hr alcohol 1hr alcohol 1.5hrhistosol 1.5hr for dealcoholizationhistosol 1.5hr3. 包埋: 将样本置于样本皿中间底部,填充石蜡(石蜡填充机要先预热使石蜡融化),真空抽气使石蜡渗入组织(65℃),之后由65℃真空抽气机中取出后静置待其自然冷却。wax (with vacuum) 1.5hr再填一次wax(with vaccuum) 1.5hr4. 切片:将样本周围多出的蜡块以单面刀片修去,修成合适的梯形。将样本卡于切片机的样本放置处,设定好角度使梯形的上下边与刀片平行,并使突出的面恰与刀片相接。安置好样本后,调整切片机刀片的角度(约10度)及切片厚度(约10μm),转动把手切片,使切片成带状且不捲曲(若不能则再检查刀片,角度等因素作适度调整),用水彩笔轻挑至温水(45℃水浴槽)中展蜡,用事先准备好之沾有蛋白胶之玻片(需确定玻片上的蛋白胶已够乾之后样本才不会在染色过程中脱落)捞起蜡片并烘乾(45℃加热板)5. 染色: 将沾有样本的玻片排列于铁架中,依下列顺序经各染色缸中染色。注意回水及脱水的程序及染色时间,可尝试不同的染色时间已得到更好的效果:xylene 15minxylene 15minalcohol 6dips 以下四步为脱蜡回水步骤95%alcohol 6dips80%alcohol 6dips70%alcohol 6dipswater 15minMayers haematoyline 约10min 以下三步为染色步骤Water 10minEosin 6dips70%alcohol 6dips80%alcohol 6dips95%alcohol 6dips95%alcohol 6dipsalcohol 6dipsalcohol 6dipsxylene 10min 脱酒精xylene 10min6. 观察颜色是否适当,是的话用封片胶封片,注意避免产生气泡7. 将欲观察的部位在光学显微镜下以数位相机拍照,再用影像编辑软体组合,纪录。时间 样本准备1-3天,脱水1天,切片+染色+封片观察约3hr备注 通常样本的准备(1)-(2)需要1-3天
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